質粒提取的小技巧
現在用質粒提取試劑盒非常方便,而且菌體培養后,可以多管濃縮提取,提到的質粒量多,可以-20℃保存,以后用于酶切、轉化等實驗,可以提前跑個膠,只要不降解,就可以繼續用,避免每次要用,都要培養一遍再提取一遍。
提取質粒的時候,后一步的酒精揮發很關鍵,基本上是其后續的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間,是空調吹熱風,或是37度溫箱放長一點的時間,我試過室溫過夜,酶切很好。
將amp濃度提高到200μg/mL,下班前接種,次日一早收獲菌體,此時OD雖然不高,質粒豐度卻不一般。菌體量少些,操作體積(管數)也小(少)。
手提質粒,如果用氛氯仿和氯仿兩步抽提,再注意一下手法,嚴格按照參考書上面的操作的話,提出的質粒不比任何質粒提取試劑盒差,我感覺好像還好一點,我就用過一次試劑盒,比較了之后不如我手提的好,以后再也沒用過了。


