人活化素A(Activin-A)ELISA定量檢測試劑盒操作流程
中文名:人活化素A(Activin-A)elisa試劑盒
別名:人活化素A(Activin-A)ELISA Kit
供貨商:上海樊克
產品規格:96T/48T
保存:2-8℃
試劑盒成分:酶標板,試劑,標準品等。
樣本:血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。
預期應用:ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。
elisa試劑盒特點:靈敏性高、特異性強、重復性好。
Elisa試劑盒產地:加拿大、德國、意大利等進口知名品牌現貨供應以及國產各類Elisa試劑盒。
Elisa試劑盒供應種類:1.人ELISA試劑盒、2.動物Elisa試劑盒、3.食品Elisa試劑盒、4.植物Elisa試劑盒、5.農產Elisa試劑盒、6.微生物細胞Elisa試劑盒、7.其他各類Elisa試劑盒。
產品用途:僅供科研使用,不得用于醫學診斷,使用前仔細閱讀本說明書。
人活化素A(Activin-A)ELISA定量檢測試劑盒試劑準備:
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
1. 標準品復溶:試劑盒提供6管標準品,每管已標定濃度,并且凍干。實驗前在每個標準品管中加入0.5mL樣本稀釋液,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動助其溶解,使其恢復為每個標準品管身標注的濃度。
2. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
人活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人活化素A(Activin-A)水平。用純化的人活化素A(Activin-A)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活化素A(Activin-A),再與HRP標記的活化素A(Activin-A)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活化素A(Activin-A)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人活化素A(Activin-A)濃度。
人活化素A(Activin-A)ELISA定量檢測試劑盒操作流程:
1、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
6、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘。
7、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
人活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒注意事項:
1.不同廠家生產的試劑盒因生產工藝和操作方法略有不同,務必按照所用試劑盒嚴格操作,否則容易產生檢測結果的不確定性。
2.若不同批號人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進行交叉使用,有可能出現顯色淺或本底高,花板等情形。
3.反應時間的誤差,做大量標本時,孔和后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正常現象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標本做奇數次復檢。
5.加樣時樣品量誤差,對于陰或很陽的標本影響不大,但對閾值附近的標本影響大,建議校對加樣器。


