牛血清蛋白的測(cè)定方法以及用途有哪些嗎?
牛血清白蛋白分子式數(shù)據(jù)為70 000,這一數(shù)據(jù)是在做PCR的時(shí)候使用的數(shù)據(jù)。
牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點(diǎn)4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成,其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽(yáng)離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。牛血清蛋白溶液可以作為測(cè)量蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)用。
一般買(mǎi)回來(lái)的牛血清蛋白是細(xì)小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。
性狀:淡黃色干燥粉末
性狀:淡黃色干燥粉末
性狀:淡黃色干燥粉末
性狀:淡黃色干燥粉末白蛋白
一般用分光光度法測(cè)物質(zhì)的含量,先要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出所測(cè)物質(zhì)的含量。因此,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是生物檢測(cè)分析的一項(xiàng)基本技術(shù) 。
5. 考馬斯亮藍(lán)法
考馬斯亮藍(lán)G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過(guò)濾。zui終試劑中含0.01%(W/V)考馬斯亮藍(lán)G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
純的牛血清血蛋白,預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白氮含量,根據(jù)其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
2. 移液管使用。
搖勻,1h內(nèi)以1號(hào)管為空白對(duì)照,在595nm處比色
3、以A595nm為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)(六個(gè)點(diǎn)為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
(4)、繪圖時(shí)近兩使點(diǎn)在一條直線(xiàn)上,在直線(xiàn)上的點(diǎn)應(yīng)該在直線(xiàn)兩側(cè)。
樣品即所測(cè)蛋白質(zhì)含量樣品(含量應(yīng)處理在所測(cè)范圍內(nèi)),依照操作步驟1操作,測(cè)出樣品的A595nm,然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或回歸方程求出樣品蛋白質(zhì)含量。
一般被測(cè)樣品的A595nm值在0.1—0.05之間,所以上述樣品如果A595nm值太大,可以稀釋后再測(cè)A595nm值,然后再計(jì)算。


