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主營(yíng)產(chǎn)品: 科研人類(lèi)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū),大鼠ELISA試劑盒代測(cè),小鼠ELISA試劑盒廠家
產(chǎn)品分類(lèi)

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技術(shù)文章

牛血清蛋白的測(cè)定方法以及用途有哪些嗎?

發(fā)布時(shí)間:2018-08-30 閱讀:965

   牛血清白蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為10的4次方這個(gè)級(jí)別,它不是一定的,而是多聚物的,有的地方測(cè)試

牛血清白蛋白分子式數(shù)據(jù)為70 000,這一數(shù)據(jù)是在做PCR的時(shí)候使用的數(shù)據(jù)。


    牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點(diǎn)4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成,其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽(yáng)離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。牛血清蛋白溶液可以作為測(cè)量蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)用。


  一般買(mǎi)回來(lái)的牛血清蛋白是細(xì)小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。


用途
1、特純級(jí)牛血清蛋白
用途:用作酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑,生化試驗(yàn)等。
電場(chǎng)対超感牛血清白蛋白截留率的影響

性狀:淡黃色干燥粉末


2、無(wú)脂肪酸牛血清蛋白
用途:用作酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑、保護(hù)劑,尤其適用于容易受脂肪酸影響的產(chǎn)品和試驗(yàn)。

性狀:淡黃色干燥粉末


3、無(wú)蛋白酶牛血清蛋白
用途:用于酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑、保護(hù)劑,尤其適合血液脂類(lèi)的診斷試驗(yàn)、脂類(lèi)診斷試劑及對(duì)純度要求高的產(chǎn)品。

性狀:淡黃色干燥粉末


4、細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)牛血清蛋白
用途:無(wú)血清培養(yǎng)基的蛋白添加劑,供細(xì)胞培養(yǎng)使用。

性狀:淡黃色干燥粉末白蛋白


測(cè)定
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

一般用分光光度法測(cè)物質(zhì)的含量,先要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出所測(cè)物質(zhì)的含量。因此,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是生物檢測(cè)分析的一項(xiàng)基本技術(shù) 


測(cè)定方法
1. 凱氏定氮法
2. 雙縮脲法
3. Folin-酚試劑法
4. 紫外吸收法

5. 考馬斯亮藍(lán)法


試劑
1. 考馬斯亮藍(lán)試劑:

考馬斯亮藍(lán)G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過(guò)濾。zui終試劑中含0.01%(W/V)考馬斯亮藍(lán)G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。


2. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:

純的牛血清血蛋白,預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白氮含量,根據(jù)其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。


器材
1. 722S型分光光度計(jì)使用及原理。

2. 移液管使用。


制作步驟
試管編號(hào) 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl (ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考馬斯亮藍(lán)試劑 (ml) 5 5 5 5 5 5 5

搖勻,1h內(nèi)以1號(hào)管為空白對(duì)照,在595nm處比色


3、以A595nm為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)(六個(gè)點(diǎn)為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

(1)、利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出回歸方程。
(2)、用公式計(jì)算回歸方程。
(3)、或用origin作圖 ,測(cè)出回歸線(xiàn)性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相關(guān)系數(shù)應(yīng)過(guò)0.999以上,至少2個(gè)9以上。

(4)、繪圖時(shí)近兩使點(diǎn)在一條直線(xiàn)上,在直線(xiàn)上的點(diǎn)應(yīng)該在直線(xiàn)兩側(cè)。


含量的測(cè)定

樣品即所測(cè)蛋白質(zhì)含量樣品(含量應(yīng)處理在所測(cè)范圍內(nèi)),依照操作步驟1操作,測(cè)出樣品的A595nm,然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或回歸方程求出樣品蛋白質(zhì)含量。


一般被測(cè)樣品的A595nm值在0.1—0.05之間,所以上述樣品如果A595nm值太大,可以稀釋后再測(cè)A595nm值,然后再計(jì)算。


注意事項(xiàng)
1. 玻璃儀器要洗滌干凈。
2. 取量要準(zhǔn)確。
3. 玻璃儀器要干燥,避免溫度變化。
4. 對(duì)照:用被測(cè)物質(zhì)以外的物質(zhì)作空白對(duì)照

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