人源血清學(xué)檢測(cè)二抗怎么選？
血清學(xué)檢測(cè)是許多健康問(wèn)題診斷過(guò)程中的關(guān)鍵檢測(cè)方法，包括器官移植篩查，交叉匹配，疾病診斷，監(jiān)測(cè)等。這些檢測(cè)在臨床決策中起著至關(guān)重要的作用，免疫分析是目前可用的zui強(qiáng)大，zui靈敏的血清學(xué)檢測(cè)方法之一，它基于抗原抗體之間的高度特異性結(jié)合，即使在低濃度下也能進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。有多種免疫測(cè)定方法，以下是其中zui常見(jiàn)兩種檢測(cè)方法示意圖，分別是夾心法（圖1A）和直接法（圖1B），當(dāng)選擇用于夾心法檢測(cè)的抗人二抗時(shí)（圖1A），需要考慮一抗的種屬，并使用與該物種有zui小交叉反應(yīng)的二抗。
圖1：測(cè)定方式：A.夾心法，B.直接法
免疫分析在多種疾病診斷起重要作用
各類(lèi)免疫測(cè)定技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)，例如，快速測(cè)定法（如膠體金側(cè)向流動(dòng)法）可在數(shù)min 內(nèi)提供定性結(jié)果，可進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)，而ELISA可能需要花費(fèi)數(shù)小時(shí)才能完成，但可提供定量數(shù)據(jù)。
而當(dāng)前嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2）大流行g(shù)eng加凸顯了側(cè)向流動(dòng)分析的，由于該疾病具有快速傳播和較高的死亡率等特征，美國(guó)FDA已采取相關(guān)措施，允許各州未經(jīng)FDA批準(zhǔn)就可開(kāi)展新的SARS-CoV-2檢測(cè)。該修訂允許使用快速檢測(cè)試劑盒，該試劑盒定性檢測(cè)患者針對(duì)SARS-CoV-2產(chǎn)生的IgG和IgM抗體，從而顯著加大了SARS-CoV-2的檢測(cè)能力，盡可能地減少病毒的傳播。盡管側(cè)向流動(dòng)檢測(cè)具有明顯的，但這種分析方法無(wú)法提供定量的數(shù)據(jù)。
表1.幾種類(lèi)型的免疫測(cè)定法的優(yōu)缺點(diǎn)，檢測(cè)過(guò)程，檢測(cè)的Ig類(lèi)型
| 免疫測(cè)定方法 | 檢測(cè)過(guò)程 | 可檢測(cè)免疫球蛋白亞型 |
| 快速測(cè)試/橫向流動(dòng)（膠體金） | 膠體金層析試紙條主要由4個(gè)部分組成：在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細(xì)作用，樣品泳動(dòng)至玻璃纖維膜，金標(biāo)復(fù)合物溶解，并與樣品進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，繼續(xù)泳動(dòng)至硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)，帶有金標(biāo)記的復(fù)合物被檢測(cè)區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)條帶。而質(zhì)控線不管有無(wú)目的樣本，都會(huì)與金標(biāo)抗體進(jìn)行結(jié)合并顯色，相當(dāng)于我們的陽(yáng)性對(duì)照，證明金標(biāo)抗體是正常的。 | IgG，IgM |
| 流式細(xì)胞 | 將血清樣品添加到帶有抗原的細(xì)胞或磁珠中，樣本中的人源抗體會(huì)捕獲抗原，再加入熒光探針偶聯(lián)的二抗（圖1B），然后可以通過(guò)流式細(xì)胞儀分析熒光以給出定量數(shù)據(jù)。 | IgG，IgM，IgA |
| 流動(dòng)注射分析（FIA） | 與流式細(xì)胞術(shù)相似，將樣品注射到含有固定抗原的柱子中，樣品中的人源抗體會(huì)與抗原結(jié)合（圖1B），再加入熒光探針或酶偶聯(lián)抗人的二抗進(jìn)行檢測(cè)，用比色或熒光法進(jìn)行檢測(cè)。 | IgG，IgM，IgA |
| ELISA法 | 將一抗固定在固體介質(zhì)表面上，通常是微孔板，隨后會(huì)捕獲抗原（圖1A）或?qū)⒖乖苯影辉诎迳希▓D1B），與來(lái)自血清的人源抗體結(jié)合，加入酶標(biāo)記的抗人二抗，zui后，添加酶底物，從而得到與分析物濃度成正比的比色讀數(shù)。 | IgG，IgM，IgA |
| 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） | 該過(guò)程類(lèi)似于ELISA，但是第二抗體是與寡核苷酸綴合。然后通過(guò)實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增和檢測(cè)。 | IgG，IgM，IgA |
抗人二抗是各類(lèi)免疫分析中的關(guān)鍵試劑
盡管免疫測(cè)定的功能和目的有所不同，但為了在臨床上獲得準(zhǔn)確，可靠數(shù)據(jù)，開(kāi)發(fā)血清學(xué)試劑盒時(shí)，高質(zhì)量試劑至關(guān)重要。抗人二抗的質(zhì)量是開(kāi)發(fā)免疫測(cè)定試劑盒時(shí)的關(guān)鍵考慮因素，二抗需要謹(jǐn)慎選擇，因?yàn)樗鼈儠?huì)結(jié)合一種一抗的多個(gè)表位上，從而增強(qiáng)了信號(hào)的靈敏度和選擇性。表2總結(jié)了在進(jìn)行免疫測(cè)定選擇合適的二抗時(shí)需要考慮的多個(gè)方面。
表2.在免疫分析中選擇合適的二抗時(shí)的考慮因素以及我們抗體的特征
