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慢病毒RNAi干擾實驗原理

發布時間:2021-03-12 閱讀:494

(1)原理
慢病毒是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構,但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性,作為基因治療載體發展起來,z近已用于轉基因動物制備。利用慢病毒構建的shRNA/miRNA載體,與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構建的shRNA相比。
一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用,另一方面,lentivirus-shRNA/miRNA克隆經過慢病毒包裝系統包裝后,可用于感染依靠傳統轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩定表達。


(2)服務流程
1)含目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構建和純化提取;
2)慢病毒干擾載體、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四質粒共轉染293T細胞;
3)培養48~72h,收集培養上清;
4)病毒的純化和濃縮(超離和/或超濾);
5)滴度測定、目的基因檢定
6)將制得的慢病毒液轉導客戶的靶細胞,篩選混合穩定細胞株,并檢測靶基因的表達。


客戶提供
1)表達miRNA/shRNA的質粒(提供測序圖譜)或所要Knockdown的靶基因的名稱、序列;
2)所需要的病毒滴度及總量,病毒是否需要純化
3)若需要檢測靶基因的表達變化,如需要請提供相應的抗體


我們提供
1)提供重組后的慢病毒載體質粒
2)提供已測定好滴度、可以直接進行后續分析的慢病毒儲存液

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