多重免疫組化vs免疫熒光
免疫熒光技術(Immunofluorescence technique,IF )又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
多重免疫組化(mIHC):主要的技術原理來自TSA技術,TSA即酪酰胺信號放大(Tyramide signal amplification)是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。該技術可與高性能染料Alexa Fluor、傳統熒光染料和比色檢測系統相兼容。 TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價鍵結合位點),產生大量的酶促產物,該產物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結合,這樣在抗原-抗體結合部位就有大量的生物素沉積,與隨后加入的Streptavidin—HRP/熒光基團結合,經幾次這樣的循環放大,可以結合大量的酶分子or熒光基團,結果使其檢測信號得到幾何級放大。


