蛋白質羰基含量檢測試劑盒說明書
蛋白質羰基含量檢測試劑盒說明書
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
產品內容:
提取液：液體25mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑0.1g×3 支，4℃保存。(使用前根據樣品數，每支加1mL水溶解，每支為10 個樣品用量)
試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：根據測定樣品量，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。(自備)
試劑六：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
產品說明：
蛋白質羰基是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志，其含量高低表明蛋白質氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。
羰基與2,4-二硝基苯肼反應生成紅色2,4-二硝基苯腙，在370nm 處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿、蒸餾水， 無水乙醇和乙酸乙酯。
操作步驟：
一、樣品處理
組織樣品：稱取約0.1g 組織樣品，加入1mL提取液，充分勻漿后于4℃，5000rpm 離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，然后取20μL測定蛋白含量，剩余的作為待測樣品。
三、計算公式
1、按蛋白濃度計算：
蛋白質羰基含量(μmol/mg prot)=(OD370測定管-OD370空白管)÷(ε×d)×V÷(Cpr×V樣品)
=(OD370測定管-OD370空白管)÷4.4÷Cpr;
2、按樣本鮮重計算：
蛋白質羰基含量(μmol/g鮮重)=(OD370測定管-OD370空白管)÷(ε×d)×V÷(W×V樣品÷V提取)
=(OD370測定管-OD370空白管)÷4÷W
ε：蛋白質羰基消光系數，22mL?μmol-1?cm-1;d：比色皿光徑，1cm;V：加入試劑六體積，1mL;V樣品：加入樣本體積，0.2mL;V提取：加入提取液及試劑一體積，1.1mL;Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。W：樣品質量，g。
注意事項：
1.試劑一使用之前根據要測定的樣品數現配，配置好后4℃保存，若變為黑色，則不能使用。
2.試劑二見光易分解，反應需嚴格避光。
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