古朵帶您分析：Elisa樣本測值低的原因
古朵帶您分析：Elisa樣本測值低的原因
ELISA 實驗中，實驗者經常會遇到樣本測值低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細胞裂解液等。假設客戶的操作完全正確，標準曲線良好， 這種情況樣本測值低可從兩方面進行分析：一是樣本本身含量可被檢測，但由 于實驗操作等原因導致樣本測值不在試劑盒檢測范圍內;二是分析物在樣品中 本身濃度偏低。下面古朵生物技術小編將從這兩個方面來進行分析導致樣本測值低的因素以及對 應的解決方案。
1.樣本本身含量可以被檢測，有哪些原因導致測值低呢?
1)試劑盒的保存
試劑盒要按照規定的方法保存，實驗者在購買試劑盒時請務必留心試劑盒 不同組分的保存方法。如優爾生的試劑盒建議檢測液 A、檢測液 B、標準品以及 酶標條等儲存在-20 度，而其它標準品稀釋液等儲存在 4 度。
2)樣本上樣前的準備
這個過程包括樣本的制備、保存以及是否有經歷過反復凍融。樣本的制備 要根據樣本類型采用不同的方法，血清、血漿與細胞裂解液的制備方法均不同。 保存，包括保存溫度以及保存時間。一般推薦樣本制備后進行分裝后儲存在-20 度或-80 度，儲存時間不宜過久，因為長時間的儲存有可能導致目標蛋白的降解， 致使檢測結果不理想。zui后注意不要反復凍融，蛋白樣本反復凍融會導致降解發生。
3)稀釋方案
樣本的稀釋對于實驗的成功至關重要，稀釋過度以及稀釋不足均有可能導 致樣本的測值低。
稀釋過度：一般情況下客戶都會根據文獻測值，以及檢測范圍估計一個稀 釋倍數，優爾生的試劑盒在出廠之前也會做大量檢測，對于常規樣本如血清血 漿，我們也會根據實驗室樣本測值情況推薦一個稀釋倍數。但實驗者如果直接 按照估計或推測的稀釋倍數進行稀釋檢測后，發現樣本 OD 非常低。這是由于文 獻作者用的樣本，優爾生實驗用的樣本與實驗者的樣本會存在一定的差異，這 些測值有一定的參考意義，但如果照搬，可能會導致實驗失敗。所以建議實驗 者在正式試驗前是先做預實驗確定樣本的有效性以及zui佳稀釋倍數。預實驗， 可參考文獻，將樣本進行梯度稀釋，zui后選取樣本 OD 落在標準曲線中間位置的 點的稀釋倍數。
稀釋倍數不夠：鉤狀效應，Elisa 實驗中發生鉤狀效應主要是當抗原與抗體 比例不合適而導致假陰性的現象，抗原過量稱為后帶效應。當樣本中目標物含 量很高，而沒有進行正確的稀釋，就有可能會導致假陰性反應。解決方案依舊 同稀釋過度的解決方案一樣，在正式實驗之前做預實驗。
2.分析物在樣品中本身濃度偏低
很多時候，客戶操作沒有問題，標準曲線良好，但檢測多次樣本依然不在 檢測范圍。像細胞因子，如 IL-6 需在炎癥刺激情況才會大量產生，一般非炎癥 樣本測值會非常低。針對這種測值比較低的情況，一般建議根據文獻選取適合 的樣本類型，同時可以選用高靈敏度的試劑盒，優爾生針對某些容易出現測值 低的指標都有研發出高靈敏度的試劑盒，如 IL-6 等。
以上就是實驗者在實驗過程會遇到的樣本測值低的部分原因，以及一些分 析以及解決方法。當然，具體問題還需具體分析。成功的 Elisa 實驗依賴于質 量過硬的試劑盒，恰當處理的樣本以及良好的操作技能
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