古朵簡述：蛋白酶K的使用方法、作用及配制
古朵簡述：蛋白酶K的使用方法、作用及配制
蛋白酶K是一種從白色念 珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶，具有很高 的比活性，是DNA提取的關鍵試劑。該酶在較廣的pH范圍(4?12.5)內及高溫 (50?70°C)均有活性，用于質粒或基因組 DNA、RNA的分離。在DNA提取中，主要作用是酶解與核酸結合的組蛋白，使 DNA游離在溶液中，隨后用不同方法進行抽提，除去雜質，收集DNA。EDTA等螯 合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。蛋白酶K貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml。 貯存于一20°C。蛋白酶K溶液為無色透明， 如出現沉淀就不能再使用。
蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲/氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩定，還具有降解天然蛋白質的能力，因而它應用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH 4-12.5)均有活性。
一、作用：
蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用，以增加探針與靶核酸結合的機會，提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細胞的結構有一定的破壞，導致組織切片的脫落，細胞核 的消失，從而影響雜交結果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現的問題，并能達到理想的染色效果。
蛋白酶K的應用比較廣泛，它可以消化包圍靶DNA蛋白，因此使用蛋白酶K能夠增加探針 與靶核酸結合的機會增強雜交信號，但在使用蛋白酶K時要主要使用的濃度，過高或者過低都會破壞細胞的結構、核消失等影響試驗結果。
二、保存方法：
保存：保存在-20℃冰箱里，避免反復凍融，有效保證12月。
孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。
三、蛋白酶K配制標準：
20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinase K)：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。
四、蛋白酶K跟蛋白酶有什么區別：
蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質的酶類的統稱,而蛋白酶K則是特指一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的降解,比如在提取DNA時溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它們不屬于同一個產品。
蛋白酶K上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量”的方針。
