實驗快訊：關(guān)于ELISA實驗測定成果過錯的原因總結(jié)

  ELISA方法被廣泛使用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡單等長處，但是在具體試驗過程中影響要素較多，而且要按照嚴厲的說明要求，在臨床查驗中除正常反響外，有時常可見到一些過錯成果(即假陽性或假陰性成果)。

  引起ELISA測定過錯成果的原因主要有：①標本要素;②試劑要素;③操作要素。本文就標本要素對ELISA測定的影響做如下評論。

  血清是常用的ELISA標本，血漿一般可視為與血清平等的標本，標本引起的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質(zhì)所構(gòu)成的，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

  1. 內(nèi)源性物質(zhì)

  普遍認為大約40%的人血清標本中含有非特異性攪擾物質(zhì)，能夠不同程度影響檢測成果。常見的攪擾物質(zhì)有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、穿插反響物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

  (1)類風濕因子

  人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結(jié)合，然后導(dǎo)致假陽性。處理該狀況的方法是：①用F(ab)2代替完好的IgG;②標本用聯(lián)有熱變性(63℃，10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG參加到標本稀釋液中同樣有用);③檢測抗原時，能夠用等參加到標本稀釋液中，使RF降解。

  (2)補體

  ELISA體系中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構(gòu)，其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被露出出來，使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來，然后構(gòu)成假陽性。處理的方法是：①用EDTA稀釋標本;②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。

  (3)嗜異性抗體

  人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來，也能構(gòu)成假陽性。處理的方法是：可在標本稀釋液中參加過量的動物Ig (s) ，但參加量缺乏或亞類不一起無效。

  (4)嗜靶抗原的本身抗體

  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合構(gòu)成復(fù)合物，在ELISA方法中均可攪擾抗原抗體測定成果。為防止以上狀況呈現(xiàn)，處理的方法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。

  (5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s) 抗體

  臨床展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫(yī)治，用放射性同位素符號鼠源性抗體的影像確診及靶向醫(yī)治等新技術(shù)，均有可能使這些患者體內(nèi)發(fā)生抗鼠抗體;別的，被鼠等嚙齒類動物咬傷的患者體內(nèi)也能夠發(fā)生抗鼠Ig (s) 抗體。這些患者ELISA測守時均可發(fā)生假陽性。處理的方法是：測定抗原時，在標本中參加足量的正常鼠Ig (s) ，然后戰(zhàn)勝因為上述原因構(gòu)成的假陽性。

  (6)穿插反響物質(zhì)

  類類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有穿插反響的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定成果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時，也會呈現(xiàn)假陽性成果。

  (7)標本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定成果有攪擾效果。

  2. 外源性物質(zhì)

  外源性物質(zhì)常常是因為用于ELISA測定的血標本的收集、儲存不妥等原因所構(gòu)成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝聚不全和采血管中添加物等影響。

  (1)標本溶血

  因為各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，攪擾測定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果，標本收集時有必要留意防止溶血。

  (2)標本受細菌污染

  因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因而，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定成果。

  (3)標本保存不妥

  在冰箱中保存過久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、乃至構(gòu)成假陽性;標本放置時刻過長(如一天以上)，有時抗原或抗體免疫活性削弱，亦可呈現(xiàn)假陰性。為戰(zhàn)勝上述攪擾，ELISA測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定，5天內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)部分濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不行激烈振動。

  (4)標本凝聚不全

  在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下，正常血液收集后1/2~2h開端凝結(jié)，18~24h徹底凝結(jié)。臨床查驗工作中，有時為了爭取時刻快速檢測，常在血液還未開端凝結(jié)時即強行離心別離血清，此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊，易構(gòu)成假陽性成果;這類狀況于次日復(fù)查時因血凝已徹底，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查成果變?yōu)殛幮?。為防止上述攪擾效果，處理的方法zui好是血液標本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清，或標本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中參加恰當?shù)拇倌齽?

  (5)標本管中添加物質(zhì)的影響

  抗凝劑(如肝素，EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性)及快速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有必定攪擾效果。

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