操作說(shuō)明：基因組DNA污染清除試劑
操作說(shuō)明：基因組DNA污染清除試劑
描述：
制備RNA 時(shí)基因組DNA 污染將會(huì)干擾下游PCR 或Northern Blot 實(shí)驗(yàn)。用RNase-free 的DNase 消化DNA 也會(huì)導(dǎo)致RNA 降解。基因組DNA 污染清除試劑不含DNA 酶，在強(qiáng)烈抑制RNA 酶的同時(shí)徹底清除RNA 樣品中的DNA 和蛋白質(zhì)污染，進(jìn)一步純化RNA。后通過(guò)乙醇沉淀回收得到的RNA 純度極高，完全不影響原有RNA 質(zhì)量和下游應(yīng)用。
用途：非酶法清除RNA 樣品中的基因組DNA 污染。每ml 試劑處理～100 μg RNA 樣品。
組成：50 ml 基因組DNA 污染清除劑，100 次。
儲(chǔ)存：4℃避光儲(chǔ)存。
使用方法：
根據(jù)起始RNA 溶液的體積，按比例加入所需試劑。以下操作以100 μl RNA 溶液為例。除非RNA 溶液中RNA 濃度很低，為方便操作可用高壓滅菌過(guò)的蒸餾水將不足100 μl 的RNA樣品的體積補(bǔ)充到100 μl。
1. 每100 μl RNA 溶液加入500 μl 基因組DNA 污染清除試劑。充分混勻，冰育1 分鐘。
2. 加入自備的lv仿100 μl。充分混勻，冰上孵育1 分鐘。
3. 12000 rpm 低溫離心10 分鐘。
4. 取上清約300 μl 轉(zhuǎn)移到新管。應(yīng)留下少量上清勿觸動(dòng)含DNA 的中間相，否則重新離心。
5. 加2-2.5 倍上清體積的無(wú)水乙醇，充分混勻，冰上或-20C 孵育20 分鐘。如果取出的上清液量較多，此步驟可加入0.6-1 倍上清液體積的異bing醇沉淀。
6. 12000 rpm 低溫離心10 分鐘。棄上清。
7. 加500 μl 70%乙醇，振蕩洗滌沉淀。12000 rpm 低溫離心10 分鐘。棄盡上清。
8. 敞開(kāi)管口，空氣干燥RNA 沉淀。
9. 加入適量自備的蒸餾水或緩沖液溶解RNA 沉淀。1% 普通瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA。
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