ELISA測定試劑盒手工操作方法
ELISA測定試劑盒手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,浸泡式進程如下:
A、吸干或甩干孔內反應液;
B、用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);
C、浸泡,即將洗刷液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖晃,浸泡時間不可隨意縮短;
D、吸干孔內液體,吸干應徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干;
E、重復操作c和d,洗刷3-4次(或按說明規矩)。
ELISA測定試劑盒操作技術的影響:
1)應保證清潔,整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸,以上的措施可以使“花板”降至低限度,從而提高檢測的特異性,并得到更準確。
2)合理安排檢測量,ELISA試劑盒以免反應板過多造成洗板等待時間長。
3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4)用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干,防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。
5)嚴重溶血:以HRP為標記的ELISA試劑盒測定中,殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性。
減少ELISA測定試劑盒誤差的方法
1.做實驗時少說話,防止唾液掉進酶標條中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同時做多個板子,多個板子別羅一起;盡量少用排槍。
4.加樣時,由低濃度向高濃度加,這樣減少跳孔的幾率。
5.勤換槍頭。
一、移液器的使用,加樣(抗體)等需要準確定量的試劑時不使用排槍,經驗證明排槍很不準確,易跳孔,不要圖買低檔的tips 因為ELISA不但會放大被檢測的目的蛋白,也會放大非特異結合的雜質蛋白。
二、倍比稀釋樣品時,稀釋倍數要小于10。
三、所有的裝跟ELISA測定試劑盒相關試劑的容器,玻璃制品的要干烤過或者使用一次性的樹脂容器。


