如何檢測GFP、GFP、YFP、EYFP、CFP抗體?
GFP是綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein)的簡稱,由238個氨基酸殘基組成。GFP蛋白質*早是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質,在藍色波長范圍的光線激發下,會發出綠色螢光。GFP或其突變體EGFP標簽系統等被廣泛用于基因表達效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分布。我們都知道GFP抗體能應用于GFP的表達檢測、純化以及定位分析。那么該如何檢測GFP其他的一些突變體,如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表達和定位呢?
我們來看一下GFP標簽與其它突變體標簽的關系。YFP(Yellow Fluorescent Protein)是黃色熒光蛋白,其序列與GFP基本相同。YFP就是把Thr203以Tyr取代,這樣的GFP不發出綠色熒光,而發出較長波長的黃色熒光,也就是YFP。因此兩者的區別則是發射波長了,在其他序列上沒有區別。而EGFP是增強型的GFP,發生了雙氨基酸取代,Leu(亮氨酸)取代GFP上的Phe64(苯丙氨酸),Thr(蘇氨酸)取代了GFP上的Ser65(絲氨酸),與GFP相比,具有更強更穩定的綠色熒光。CFP(Cyan Fluorescent Protein)與此類似,也是GFP第66位上的酪氨酸Tyr被色氨酸(Thr)所取代的結果,發藍色熒光。由此可見,GFP標簽與其它突變體GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的類似,只有1-2個氨基酸殘基的變化。
EarthOx GFP標簽抗體用于IF實驗 EarthOx GFP標簽抗體用于WB實驗,1道為陰性對照,2道為1:1000倍稀釋
我們先看一下EarthOx的單克隆GFP抗體——Anti-GFP Tag Mo


