實驗室常見的支原體檢測方法你了解嗎?
支原體是一類能自我復制的zui小的原核生物，可透過一般過濾膜且對抗生素具有一定耐藥性，是原代細胞跟傳代細胞的常見污染物，其會改變細胞的 DNA、RNA 及蛋白表達。
支原體污染嚴重危害科研學者們的勞動成果，早發現早處理，把損失降到zui低。《藥典三部
2015 版》-3301 支原體檢驗-要求應同時進行培養法和指示細胞培養法（DNA
染色法），也可采用檢驗機構認可得其他辦法。這里筆者來簡單介紹一下目前實驗室常見的支原體檢測方法：
1.培養法
培養法是通過將待檢測樣品先接種到支原體液體培養基中大量繁殖，然后再轉接種到支原體固體培養基中，培養一段時間后（大約一個月），如果固體培養中出現典型的支原體菌落，則說明待測樣品有支原體污染。
2、RD-RCA 恒溫法（MycoBlue Mycoplasma Detector）
吸取 1 ul 細胞培養上清液加入到反應體系中，孵育 1 小時，若細胞培養物被支原體污染，支原體 DNA 保守系列會被等溫 DNA 聚合酶特異性擴增，使得反應液由紫色變成天藍色。肉眼可觀察。
3.熒光染色法（Mycoplasma Stain Assay Kit）
該方法主要是能與 DNA 特異性結合的熒光染料 Hoechst33342 或 Hoechst33258，可使支原體內 DNA 著色，染色后可用熒光顯微鏡觀察。
4.酶活法（TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit）
支原體溶解時釋放出來的酶與
TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit 中提供的底物發生催化反應，將 ADP 轉化成
ATP，而 ATP 含量的上升，能通過生物發光化學反應檢測，并通過分光光度計進行讀數，從而達到檢測支原體的目的。
5. PCR 法（Genloci-Mycoplasma Detection Kit）
利用對支原體基因組中保守的編碼域序列進行 PCR 檢測的方法來進行支原體檢測的。
除此之外還有相差顯微鏡法和電鏡掃描法，不過，因其限制因素較大，在此不進行說明。
zui后，單獨使用目前市場上任何一種支原體檢測試劑盒，都無法做到 準確。嚴格的支原體檢測，應至少使用二種及以上檢驗方法來確定檢驗準確性。
