同樣是慢病毒感染細胞,為什么你的效率那么低!
并且作為基因載體在治療各類遺傳性和后天性的人類疾病中倍受歡迎:從基礎研究發展到臨床階段,高濃度、高感染效率的慢病毒都是感染細胞表達(或沉默)目的基因的理想分子工具。
那么慢病毒在感染細胞中有什么優良表現呢?
慢病毒感染細胞的步驟一般是這個樣子的,以「24 孔培養板、貼壁細胞」為例:
Day0: 接種細胞
每孔按 5×104 個待感染細胞鋪板,用含有 10% FBS 的 DMEM 培養基培養;
Day1: 細胞感染
感染前,根據說明書用完全培養基配置感染液,備用吸掉舊培養基,更換為感染液; 并參考細胞 MOI 值,計算病毒使用量,加入病毒進行感染,混勻;
Day2
病毒感染 8~16 h 后,換回常規培養基,繼續培養;
Day3~4: 確認感染效果
感染 72 h 后,顯微鏡下觀察感染效果,如 EGFP、Cherry 的表達情況;
如果都這么簡單的話,那你真的是 too young too simple!
那么在慢病毒感染細胞過程中,到底會遇到哪些問題呢?此貼統統幫您搞定~~
難感染問題該如何解決?
對于一些較難轉染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,可以通過添加病毒感染增強液來顯著提高轉染效率。


