豬藍耳抗體ELISA檢測試劑盒上市啦!
一、原理簡介
本試劑盒采用間接ELISA檢測血清中的藍耳病毒(PRRSV)抗體。其基本原理如下:用N蛋白抗原制備包被微孔板,HRP酶標記物為抗豬IgG。檢測時,向微孔板中加入稀釋后的待測樣品,洗板后,加入HRP標記抗體,如果血清中含有藍耳抗體,則抗體會與酶標板上的包被的抗原結合,酶標抗體也會與血清中的藍耳抗體結合,加入底物后,顏色反應的深淺與樣品中存在的藍耳抗體的量成正比。
二、試劑盒組份
包被板:192T(12條′8孔,2塊)。
酶標記物:20.0ml/瓶,1瓶。
樣品稀釋液:60ml/瓶,1瓶??勺鳛殛幮再|控使用。
陽性質控:1.80ml/瓶,1瓶。含有藍耳抗體。
洗液:60ml/瓶,1瓶。20倍濃縮液,用前稀釋。
底物A:、:12.0ml/瓶,1瓶。含有過氧化氫的緩沖液。
底物B:12.0ml/瓶,1瓶。含有TMB的緩沖液。
終止液:12.0ml/瓶,1瓶。含有硫酸的緩沖液。
板貼、說明書、自封袋:1套。
三、注意事項
不同批次的組份不可混用,且只能在效期內使用。
如果待檢標本含有懸浮物、絮狀物等不溶物,請離心去除。且含有疊氮鈉的標本不可用。
四、試劑準備
測試前將試劑盒組份置于室溫(18-25℃)平衡30分鐘,測試后應立即放回2-8℃保存。
洗滌液:將濃縮洗液按照20倍比例用蒸餾水稀釋,混勻后備用。
樣品準備:按照常規方法制備血清,用試劑盒中配套的稀釋液稀釋,樣品按照1:60稀釋。(比如:5μl樣品加入到295μl樣品稀釋液中)
五、檢測步驟:
取出所需要的板條。剩余的板條裝入自封袋中,置于2-8℃保存。
先向每孔中加入100μl稀釋后的待測樣品、陰性質控(樣品稀釋液)、陽性質控(不稀釋),其中陰性質控重復加兩孔,陽性質控重復加兩孔。
輕輕震動10-20秒混勻,貼上板貼。
置于37℃水浴鍋中溫育30分鐘??鄢字幸后w,并用洗液洗滌5-7次。在干凈的紙巾或毛巾上拍干,盡量去除殘留的水分。
每孔中加入100μl的酶標記物,輕輕震動10-20秒混勻,貼上板貼。
置于37℃水浴鍋中溫育30分鐘??鄢字幸后w,并用洗液洗滌5-7次。在干凈的紙巾或毛巾上拍干,盡量去除殘留的水分。
每孔依次加入50μl底物A和50μl底物B,輕輕震動10-20秒,置于37℃,避光反應15分鐘。
每孔加入50μl終止液,輕輕震動幾次混勻。使藍色液體完全變為黃色液體。
在10分鐘內,測量450nm處的吸光度(OD450)。
六、結果判斷及計算:
1、陰陽性質控平均值計算
陽性質控平均值 =(陽性質控1+陽性質控2)/2
陰性質控平均值= (陰性質控1+陰性質控2)/2
2、實驗有效性判定:應滿足,
陽性質控平均值 – 陰性質控平均值 >= 0.150
陰性質控平均值<=0.450
3、樣品S/P值計算:
S/P=(樣品A- 陰性質控平均值)/(陽性質控平均值 – 陰性質控平均值)
4、結果判定:
陰性:S/P<0.50;陽性:S/P >= 0.50。
七、儲存條件及效期
2-8℃保存,有效期為6個月。
八、與進口elisa試劑盒比對
在一次實驗中檢測113份樣品,同時用美國進口ELISA試劑盒做對比,總符合率超過99%,只有一份樣品略有差異。


