自從PCR技術(shù)作為臨床診斷方法以來，實驗室污染一直是影響檢測質(zhì)量的罪魁禍。雖經(jīng)多次技術(shù)改進和換代，實驗室污染就像冬季的霧霾很難徹底去除，特別是“自動化核酸提取儀”在臨床應(yīng)用，如果進行嚴格的污染監(jiān)控，幾乎所有的核酸提取儀器都會淪陷。這也許是我們無顏去響應(yīng)歐肝會（HBV DNA<10~15IU/mL）或美肝會HBV DNA<5~10IU/mL）倡導(dǎo)的靈敏性。
    回顧歷次PCR技術(shù)的更新?lián)Q代，似乎都遵循了這樣一個規(guī)律，那就是新一代試劑盒或多或少會解決上一代技術(shù)存在的問題，如檢測敏感性逐漸得到提升、檢測步驟逐漸得到簡化、實驗室污染逐漸得到控制，現(xiàn)就PCR技術(shù)的歷次更新?lián)Q代分析如下。
    di一代試劑盒
    即采用電泳法進行結(jié)果鑒定，那時實驗室人員對污染還沒有清楚的認識，當(dāng)從“飲水中”也擴增出“結(jié)核桿菌”時，才意識到問題的嚴重性，于是1998年衛(wèi)生部暫停PCR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用。人們把污染的元兇歸結(jié)為“電泳”二字，隨后出現(xiàn)了“ELISA-PCR”或雜交梳等核酸檢測方法，由于同樣是產(chǎn)物開放性鑒定，并沒有改變污染成災(zāi)的事實，反而使人們對PCR技術(shù)能否用于臨床診斷產(chǎn)生了質(zhì)疑！
    第二代試劑盒
    即實時熒光PCR技術(shù)的產(chǎn)生，由之前的開放性核酸鑒定方法，變成由熒光染料或Taq MAN探針為信號源的閉管鑒定，避免了擴增產(chǎn)物外泄的實時熒光PCR技術(shù)，事實證明實驗室污染并沒有得到完全控制，于是有些把罪魁禍歸結(jié)為“煮沸”帶來的氣溶膠，同時認為“煮沸”得來的核酸干擾物質(zhì)太多，是影響檢測敏感性的主要原因。
    第三代試劑盒
    即 “微量核酸釋放劑”法，2002年本人根據(jù)HBV DNA的高度穩(wěn)定性和對PCR擴增條件要求不高等特點，研發(fā)出無需進行核酸提取或純化的“一步法”HBV DAN檢測技術(shù)，由于操作方法簡單、快速，很受實驗室人員歡迎，在接下來的幾年里，陸續(xù)有試劑廠家獲得注冊證書?！耙徊椒ā北苊饬酥蠓蟹▽?dǎo)致的氣溶膠，也簡化了操作步驟，但實驗室污染也并未因此得到解決，這也是許多人無法理解的問題！
    第四代試劑盒
    即“磁珠”核酸提取技術(shù)，是免疫化學(xué)發(fā)光自動化技術(shù)的應(yīng)用，促使了核酸自動化的變革，磁珠核酸制備方法實現(xiàn)了儀器批量操作，也就是所謂的自動化。第四代試劑盒與第二代和第三代試劑盒的不同，磁珠法獲得的核酸純度和和得率都較傳統(tǒng)方法有大幅度提升，也就出現(xiàn)了“高敏”、“超敏”等名詞。其實，磁珠核酸制備方法非但與“柱提法”沒有本質(zhì)區(qū)別，反而如果核酸制備過程存在動力混勻、加熱、核酸洗脫、移管、磁珠殘留等環(huán)節(jié)，形成污染“PM2.5”的幾率遠遠高于“柱提法“，這也是動態(tài)核酸制備無法避免污染的根源所在。羅氏COBAS采用SPU進行核酸制備，在檢測量不大的情況下實驗室污染并不明顯，但其他形式的“全自動或半自動核酸提取儀”，雖然都植入了預(yù)防污染的概念，但實踐證明，污染均難防難清。
    第五代試劑盒
    即靜態(tài)核酸制備技術(shù)。該技術(shù)的發(fā)明算是突破傳統(tǒng)的“黑科技”，核酸制備過程直接在PCR擴增管中進行；樣本直接加到核酸裂解液中無需混勻（靜態(tài)加樣），同時還避免了吹打混勻?qū)е碌暮怂醽G失；核酸漂洗無需混勻磁珠（靜態(tài)漂洗）；廢液封閉收集；核酸磁珠參與PCR擴增（無核酸磁珠外露）。這種靜態(tài)核酸制備技術(shù)不但實現(xiàn)了“污染可控”，還大大降低了操作技術(shù)門檻、提升了PCR檢測的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
第五代試劑盒的出現(xiàn)，解決了上面四代試劑盒存在的諸多缺陷，zui大的收益是“簡單快速”、“實驗室污染可控”和“結(jié)果的高度重復(fù)性”，應(yīng)該說是臨床熒光PCR技術(shù)的一場革命。

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