古朵生物:抗凝收集血漿的方法
收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。其方法如下：
1、肝素抗凝：
Z常用的抗凝劑，一般情況下對相關(guān)指標都不會有干擾，同時抗凝比例較大（抗凝劑： 全血=1:30），對血液基本沒有稀釋影響。
肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖，帶有強大的負電荷，具有加強抗凝血酶III滅活絲 氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測，是電解質(zhì)檢測的zui佳選擇，檢驗血標本中的鈉離子時，不能使用肝素鈉，以免影響檢測結(jié)果。也不能用于白細胞計數(shù)和分類，因肝素會引起白細胞聚集。 盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無顯著差別，但肝素鋰還是被認為是zui好的。這主要是人們認為肝素鈉可使鈉的測定值偏高，肝素銨可使血氨測定值偏高（尿素酶法測定）。
肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶，如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等，可影響PCR 的實驗結(jié)果。可采用一些方法消除肝素的抑制效應(yīng)，如利用肝素酶，或在分離白細胞后用緩沖液洗滌白細胞兩次以上等。然而，許多實驗工作者仍不愿意在進行分子生物學(xué)實驗時采用肝素作抗凝劑。
2、EDTA抗凝：
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸，可以有效地鰲合血液中的鈣離子，鰲合鈣會將鈣從 反應(yīng)點移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程，從而防止血液凝固，與其他抗凝劑比較而言，其對血球的凝集及血細胞的形態(tài)影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查，不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。由于EDTA會螯合重金屬離子，用該抗凝劑的話，部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失，具體看客戶測定的指標來選擇，做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。
3、枸櫞酸鹽抗凝：
檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用，臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦為3.2％或3.8％，抗凝劑與血比例為1：9，主要用于纖溶系統(tǒng)(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。采血時應(yīng)注意采足血量，以保證檢驗結(jié)果的準確性，采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9），對血液有一定的稀釋，一般不建議。
選擇抗凝的注意點：
①.每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②.收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③.抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿）;
④.抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后 用于測定。
血清、血漿收集好后，暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復(fù)凍融，-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月。
