多肽固相合成法是多肽合成有機(jī)化學(xué)的一個(gè)重大的提升。它的大的優(yōu)點(diǎn)是不必純化中間物質(zhì)，合成過(guò)程能夠連續(xù)開展，從而為多肽合成的自動(dòng)化奠定了基本。目前全自動(dòng)多肽的合成，基本上全是固相合成。其主要過(guò)程以下：

根據(jù)Fmoc化學(xué)合成，先將所需合成的目標(biāo)多肽的C-端氨基酸的羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不可溶的高分子樹脂相接，然后以這一氨基酸的氨基做為多肽合成的起始點(diǎn)，同其他的氨基酸早已活化的羧基功效產(chǎn)生肽鍵，持續(xù)重復(fù)這一過(guò)程，就可以獲得多肽。依據(jù)多肽的氨基酸構(gòu)成不一樣，多肽后處理方法不一樣，純化方法也是有差別。

1.做免疫用的多肽多長(zhǎng)為合適?
一般約10-15個(gè)氨基酸，自然長(zhǎng)一些免疫效果非常的好一些，但是合成費(fèi)用也會(huì)提升。MAP多肽則期待長(zhǎng)短在15aa之上，實(shí)際效果不錯(cuò)。此外，10aa下列的多肽免疫實(shí)際效果非常差。

2.免疫用多肽的純度必須很高嗎?
一般而言，免疫用Peptide，70-85%就可以。

3.大家合成的多肽溶解性不太好，多肽就有問(wèn)題對(duì)不對(duì)?
難以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)一個(gè)多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。假如多肽無(wú)法溶解就覺(jué)得多肽合成有問(wèn)題這一觀念并有誤。

4.多肽情況是怎樣?如何保存存儲(chǔ)?
大家?guī)?lái)的多肽是粉狀，一般為灰白，構(gòu)成不一樣，多肽粉末狀的色調(diào)有差別，多肽一般長(zhǎng)期性儲(chǔ)存必須遮光儲(chǔ)存，并應(yīng)儲(chǔ)存在-20度，短期內(nèi)能夠儲(chǔ)存在4度。能夠短期內(nèi)得話是以室內(nèi)溫度運(yùn)送。

5.怎樣溶解多肽
溶解多肽是比較復(fù)雜的事兒，一般難以一下子明確合適的有機(jī)溶劑。一般是先取一點(diǎn)實(shí)驗(yàn)，在都沒(méi)有明確合適的有機(jī)溶劑前千萬(wàn)別合部溶解。以下方式有利于您挑選合適的有機(jī)溶劑：
(1)判斷多肽的正電荷特殊，設(shè)置酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1；堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其他氨基酸的正電荷為0。測(cè)算出將電荷數(shù)。
(2)假如凈電荷數(shù)>0，多肽為堿性，自來(lái)水溶解：如果不溶解或溶解性并不大，加入醋酸(10%之上)；假如多肽還不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀釋。
(3)假如凈電荷數(shù)<0，多肽為酸性，自來(lái)水溶解；如果不溶解或溶解性并不大，加入氨水(25ul)溶解，然后加入500ul水稀釋。
(4)假如凈電荷數(shù)=0，多肽為中性，一般必須用有機(jī)溶劑如乙腈，甲醇或異丙醇，DMSO等溶解。也有人建議必須尿素來(lái)溶解疏水性非常大的多肽。

6.非HPLC純化的多肽中有什么雜質(zhì)?
粗品和除鹽等級(jí)的多肽中多肽和非多肽類雜質(zhì)：如非總長(zhǎng)多肽和多肽后處理的一些原材料如DTT、TFA等。

7.HPLC純化的多肽有什么雜質(zhì)?
歷經(jīng)HPLC純化的多肽，仍會(huì)出現(xiàn)一些一些雜質(zhì)存有，在其中的雜質(zhì)主要是短肽和少量TFA。

8.多長(zhǎng)的多肽為合適?
多肽合成必須考慮到多肽的長(zhǎng)短，正電荷，親疏有別水溶性等要素。長(zhǎng)短越長(zhǎng)，合成粗品的純度和產(chǎn)出率都隨之減少，純化的困難和沒(méi)法合成的概率便會(huì)大些。自然多肽功能分區(qū)的編碼序列是難以改的，可是為了好地多肽的順利合成，有時(shí)候必須在作用取的上中下游提升一些輔助氨基酸，以改進(jìn)多肽的溶解性和親疏有別水溶性。假如多肽過(guò)短，合成也很有可能有問(wèn)題，關(guān)鍵情況是合成的多肽后面處理方式中有一定的難度系數(shù)，5肽下列的多肽，一般要有親水性的氨基酸，不然后處理難度系數(shù)增加。15個(gè)氨基酸殘基下列的多肽一般都能夠取得認(rèn)可的產(chǎn)出率和得率。

9.怎樣從多肽編碼序列中判斷多肽的溶解性?
(1)多肽中假如帶有高比率的疏水性較強(qiáng)的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，多肽難以溶解與水溶性水溶液中或壓根不太可能溶解。這種氨基酸不論是純化或合成，都是有很有可能有問(wèn)題。
(2)一般狀況下疏水性氨基酸的占比<50%，不可以連續(xù)5個(gè)連續(xù)aa為疏水性，帶正電荷的氨基酸的(正電K,R,H,N-terminus,負(fù)電D,E,C-terminus)的占比做到20%，在多肽的N或C短假如能提升旋光性氨基酸，還可以改進(jìn)溶解性。

10.為何帶有Cys,Met,或Trp的多肽難合成?
帶有Cys,Met，或Trp的多肽無(wú)法合成，與此同時(shí)難以獲得高純的商品。關(guān)鍵是因?yàn)檫@種官能團(tuán)不穩(wěn)定，易空氣氧化。這種多肽的應(yīng)用和存儲(chǔ)都必須需注意，防止不斷打開外蓋。

11.為何有一些多肽的合成產(chǎn)出率或純度會(huì)非常低?
多肽合成與引子合成有非常大的差別，不可以合成的引子非常少，可是不可以合成的多肽經(jīng)常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這種氨基酸鄰或重復(fù)時(shí)，多肽鏈在合成過(guò)程中無(wú)法完全舒展溶解，合成效率降低。下列多種情況，合成效率和物質(zhì)的純度都非常低，如：重復(fù)Pro,Ser-Ser，重復(fù)Asp，4個(gè)連續(xù)Gly等。

12.多肽是怎樣純化的?
多肽純化一般應(yīng)用正相反柱(如C8，C18等)，214nm。緩存管理體系一般為含TFA的有機(jī)溶劑，pH2.0。BufferA為含0.1%TFAinddH2O，BufferB為1%TFA/ACN/pH2.0。純化前用BufferA溶解；假如溶解不太好，用BufferB溶解后，然后用BufferA稀釋；對(duì)疏水性強(qiáng)的多肽，有時(shí)候還必須加入少量的FormicAcid或醋酸。HPLC剖析多肽粗物質(zhì)，假如多肽不長(zhǎng)(15aa下列)，一般會(huì)出現(xiàn)主峰，主峰一般為總長(zhǎng)物質(zhì)；針對(duì)20aa之上的長(zhǎng)肽，要是沒(méi)有主峰，HPLC需配搭Mass來(lái)判斷相對(duì)分子質(zhì)量，從而明確哪個(gè)峰是所需合成的多肽