多重免疫熒光染色實驗 常見問題解答
問：樣本可以做成冰凍切片嗎？
答 可以的?？乖迯筒襟E不推薦用加熱的方法，推薦用抗體洗脫液
問 所有操作要避光嗎？
答 不需要，在常規環境下操作就可以，染料的熒光強度很高。
問 抗體修復液每一輪修復都要換嗎？
答 是的，每一輪都要根據抗體選擇相應的修復液。
問 染料的選擇會影響后染色嗎，有共定位的話怎么辦？
答 共定位的情況，我們可以通過單一通道觀察來好的檢測各指標的分布情況，染料不會對染色有影響，串色的情況需要預實驗做充足，包括抗體稀釋比例，染料與放大液比例，修復條件的確定。
問 多色用的一二抗各是什么種屬？
答 多色的優勢在于一二抗種屬無需特別要求，一抗根據樣本種屬選擇既可，二抗根據一抗選擇即可，多個抗體組合，種屬不會有影響。
問 抗體洗脫和微波修復哪種方式洗脫？
答 微波修復洗脫穩定，抗體洗脫液對大多數抗體都管用，難洗的抗體延長洗脫時間就可以啦！
問 實驗用時真的一天能做完嗎？
答 相比普通的組織熒光實驗，我們一抗的孵育時間只需室溫30min，二抗和信號放大步驟只需孵育10min，能大大節約時間，五色左右可在一天內做完。
問 多色樣本的寄送有條件限制嗎？
答 正常的石蠟切片和組織芯片很穩定，只要防震盒常溫運輸即可，冰凍切片的話，需要干冰低溫運輸。
問 我的組織還有GFP蛋白，給結果的時候能排除干擾嗎？
答 可以的，結果分析的時候可以避免綠色通道，分析軟件賦予的顏色是偽彩色，可以換其他顏色。
問 我這邊提供抗體的話，抗體需要滿足什么條件嗎？
答 抗體起碼要滿足IHC/IF的實驗應用，各品牌供應商都會提供相應的實驗驗證的，我司組化抗體經過嚴格實驗驗證，是不錯的選擇。
問 如果我能提供抗體給你們做服務的話，需要的抗體量是多少？
答 需要的抗體量要根據樣本數來，但一般來講，50-100ul的抗體足夠完成預實驗+正式實驗了。問 在指標與染料的搭配以及染色順序上，有什么規律嗎？
答 并沒有一個特別的線性關系，和蛋白的種類、表達量以及修復條件都有關系，所以會多因素考慮，多嘗試，預實驗很重要。
問 TSA技術原理中有抗體洗脫的步驟，但是在你們的試劑盒步驟說明中卻沒有？
答 試劑盒步驟中的抗原修復過程就是抗體洗脫過程。
問 B細胞、T細胞、DC細胞常用maker能推薦下嗎？
答
T細胞：CD3、CD4、CD8、FoxP3（再細化還有：GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45）
B細胞：CD19 ；
DC細胞：CD8α、CD11b
