古朵詳解：影響ELISA法手工測(cè)定的因素
標(biāo)簽：ELISA試劑盒 古朵生物 酶聯(lián)免疫試劑盒
古朵詳解：影響ELISA法手工測(cè)定的因素
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡(jiǎn)便、無(wú)放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，影響結(jié)果的因素古朵生物小編詳解如下。
1 試劑盒
(1)抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽(yáng)性。
(2)酶結(jié)合物濃度過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
2 試驗(yàn)儀器
(1)加樣器是否經(jīng)過(guò)校正，酶免測(cè)定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會(huì)使結(jié)果忽高忽低。
(2)每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無(wú)堵塞。
3 操作
(1)檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低。
(2)加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(3)洗滌不充分，會(huì)使結(jié)果假性增高，過(guò)分洗滌呈假陰性。
(4)比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無(wú)異物、無(wú)水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高。
(5)抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到完全平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。總之，由于ELISA實(shí)驗(yàn)的影響因素較多，在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。
