古朵詳述、酶聯免疫吸附劑測定ELISA的相關問題
古朵詳述、酶聯免疫吸附劑測定ELISA的相關問題
1 如何洗板?
文獻說“手工洗板時每次加入洗滌液后,應靜置15-30s,不要將一個酶標孔中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。”
想問的是:“甩去洗滌液”中如何“甩去”?如果整塊板一起甩不會導致交叉污染嗎?請內行詳細指點一下。
2 標本為動物腦勻漿,需要稀釋嗎?稀釋多少倍合適呢?
1.我經常這么干沒有遇到交叉污染的問題,就是整塊板翻轉,洗滌液倒入下水道以后,維持孔朝下底朝天的樣子往下甩動板,跟瓶子里的后一點水想倒出來的動作差不多.我一般覺得是往下甩,避免左右晃動比較好.不過你如果擔心污染,不甩也沒有關系,直接扣在吸水紙上吸干也是可以的,但是甩幾下,省很多紙啊.重點是洗滌液倒干凈之前不要把板翻回來正面.但是倒干凈也不等于完全干掉,只要液體少到無法流淌就可以了,如果真干了的話,抗體抗原的結合可能失效.
倒掉樣本時候需要小心,之后的洗滌步驟其實不容易污染.
2.動物腦勻漿我沒有做過.提醒你跟試劑生產商確定好是否能夠測這種樣本.我曾經遇到過ELISA試劑對含人血清的樣本發生非特異性反應的倒霉情況,問了生產商才知他們根本沒有測試過人血清。
如果生產商測試過動物腦勻漿的話,應該也能夠告訴你恰當的稀釋倍數。
第二個辦法是從文獻中找先例,沿用別人優化過的試驗方案。
否則的話,你需要先做一個稀釋試驗,使用幾個你確定為陽性的樣本(不要次就用上你珍貴的實驗樣品),稀釋4X,10X,100X三個倍數應該夠了(我做過的幾個ELISA試劑對血清樣本的建議倍數是4倍比較常見),加上未稀釋的你就有四個濃度梯度。關于稀釋的注意事項你如果不清楚再問吧。
既然如此,你就應該跟生產商要制作勻漿的實驗方法啦,跟著他們的辦法做為保險。如果是大公司,兩個工作日之內一定會有回復,有時候網站上就能找到這種信息。
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