古朵快訊——新生牛血清蛋白檢測指標(biāo)有哪些?
新生牛血清蛋白檢測指標(biāo)有哪些?
新生牛血清(Newborn Calf Serum)是來自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血。經(jīng)大規(guī)模混合后除菌過濾制成成品，主要用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，是醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品的重要原材料之一，其質(zhì)量好壞直接影響細(xì)胞生長情況。
總蛋白含量是新生牛血清需要檢查的指標(biāo)。它屬于化學(xué)成分的初步分析。有人統(tǒng)計(jì)過國產(chǎn)新生牛血清的蛋白含量1，在比較各產(chǎn)區(qū)各年份后，發(fā)現(xiàn)其含量在3.7%~4.4%之間。進(jìn)口新生牛血清并不與之*一致。因?yàn)閲鴥?nèi)的血清常采自奶牛，而國外的血清常采自肉牛。蛋白質(zhì)是新生牛血清的主要成分，在細(xì)胞培養(yǎng)中起著維持滲透壓、pH 值緩沖、物質(zhì)運(yùn)輸和提供營養(yǎng)、促進(jìn)細(xì)胞粘附等重要作用。在胎牛血清中，其總蛋白含量要低。
血紅蛋白含量也是新生牛血清一項(xiàng)重要檢測指標(biāo)。它是在血清運(yùn)輸和加工過程中細(xì)胞裂解釋放到血清中的。之所以檢測主要是由于牛血清中血紅蛋白具有氧化性，其含量過高會(huì)引起羧基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而導(dǎo)致生產(chǎn)細(xì)胞受損，也會(huì)增加下游純化處理的難度，給藥品質(zhì)量帶來安全隱患2。有報(bào)道血紅蛋白具有神經(jīng)毒性。在腦皮層細(xì)胞的體外培養(yǎng)中，培養(yǎng)24小時(shí)后，血紅蛋白會(huì)造成神經(jīng)元的廣泛死亡(EC50為1-2.5μM)3。在《中國藥典》三部(2015 版)中，要求對新生牛血清中血紅蛋白含量應(yīng)不高于200 mg/L，方法主要為分光光度法。
使用時(shí)常見問題及解決方法：
一、保存血清-好的方法?
血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃時(shí)，請勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
二、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
三、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1.解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2.解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
3.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
5.若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。
四、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。
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