ELISA試劑盒操可能會出現的問題及解決辦法
ELISA試劑盒操可能會出現的問題及解決辦法
>> 問題顯色淡，靈敏度偏低
可能原因
1、試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高
2、試劑盒未充分平衡
3、培養箱溫度不足37℃
4、保溫時間不足
5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加
6、移液器吸液量不足，吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔
7、蒸餾水水質有問題
8、底物作用時間不足
問題可能原因解決方法
盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫
試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
注意培養箱溫度，放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定，非隔水式培養箱尤其應注意
校正定時鐘準確定時
按試劑盒說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數
校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內壁要清潔，好一次性使用
使用新鮮合格的蒸餾水
準確定時
>> 背景深，全部呈有色
可能原因
1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留
2、樣品污染
3、培養箱溫度超過37℃或反應時間過長
4、吸嘴重復使用，未洗凈或消毒不
5、蒸餾水被污染
6、酶等試劑混用
7、一次實驗的標本量過多，加樣時間太長，導致實際反應時間延長
解決方法
濃縮洗液準確配制;10倍濃縮洗滌液如有結晶則應讓結晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌，拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染
樣品應新鮮采集，或低溫保存，防止污染
調整培養箱溫度，準確定時
吸嘴盡可能一次性使用
使用新鮮蒸餾水
不同批號試劑勿混用
合理安排實驗，避免幾塊酶標板同時加樣
>> 重復性不佳
可能原因
1、樣品數量多少不一，加樣時間有長有短
2、保溫時間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致
3、加樣量不一致
解決方法
重復某一樣品時，加樣時間盡可能與次接近
重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性
樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
>> 出現白板，陽性對照不顯色
可能原因
1、顯色液變質
2、洗滌液配制有誤
3、未加酶結合物而認為已加入
4、終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用
解決方法
換新的顯色液
請按試劑盒說明書所示稀釋倍數配制
注意不要漏加
每次加液前均應看清標簽
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