古朵介紹：關于常見細胞裂解液及其組分
古朵介紹：關于常見細胞裂解液及其組分
在許多細胞內蛋白表達、純化及蛋白-蛋白互作等免疫實驗(如WB、IP、Co-IP、ChIP)中，細胞裂解是關鍵一步。
基本介紹
根據不同細胞類型、蛋白定位及下游應用，需要不同的細胞裂解液進行細胞裂解及蛋白提取(表1)。
表1 根據不同蛋白定位選擇裂解液
蛋白定位 裂解液
全細胞 NP-40、RIPA
細胞質(可溶性蛋白) Tris-HCl
細胞質(細胞骨架等不溶性蛋白) Tris-Triton
細胞膜 NP-40、RIPA
細胞核 RIPA
線粒體 RIPA
差異化比較
RIPA裂解液
RIPA裂解液是一種傳統的細胞組織快速裂解液，獲得的蛋白樣品可用于常規WB、IP等實驗。
組分：25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)。
IP裂解液
IP裂解液是一種改良后的RIPA裂解液，具中等強度效力，可高效溶解細胞蛋白，但不會像RIPA一樣釋放染色體組DNA或破壞蛋白復合物。適合下游免疫沉淀或親和吸附應用。
組分：25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。
NP-40裂解液
NP-40裂解液是一種很溫和的非離子型去垢劑，與蛋白結合力強，尤其適用于膜蛋白非變性條件下的溶解。
組分：50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化鈉、1%NP-40;加蛋白酶抑制劑：抑肽酶、亮肽素、胃抑素，每種1μg / ml;使用前立即添加1mM PMSF。
Tris-Triton裂解液
Tris-Triton裂解液是非離子型表面活性劑，效力介于NP-40和SDS之間，下游應用有WB、ELISA、IP。
組分：10mM 三羥甲基氨基甲w(Tris)，pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧膽酸鈉。
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