對于小鼠白介素6 ELISA免疫測定，您真的了解嗎?
對于小鼠白介素6 ELISA免疫測定，您真的了解嗎?
ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-l
ELISA免疫測定目的是?
1.測定體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等;
2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等;
3.測定抗生素和藥物;
4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等;
5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等;
ELISA免疫測定原理：
①使抗原(或抗體)結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性;
②使抗原(或抗體)與某種酶聯結成酶標 抗原(或抗體)，而且此酶標抗原(或抗體)既保留其免疫活性，又保留其酶活性;
③測定時將受檢標本(抗體或抗原)和酶標抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，zui后結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。
小鼠白介素6 ELISA免疫測定步驟：
1.包被;
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔);
3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘;
5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml;
6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。
注意：引起ELISA測定錯誤結果的原因有標本因素、試劑因素、操作因素。
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