人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)試劑盒說明書

  l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)的含量。

  l 有效期：6個月

  l 保存條件：2-8℃

  實驗原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

  樣本處理及要求

  1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

  2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

  3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

  注：標本溶血會影響檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

  需要而未提供的試劑和器材

  1. 酶標儀(450nm)

  2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3. 37℃恒溫箱

  4. 蒸餾水或去離子水

  人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)試劑盒(ELISA)試劑盒組成 名稱96孔配置48孔配置備注

  微孔酶標板8孔×12條8孔×6條無

  標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無

  樣本稀釋液6mL3mL無

  檢測抗體-HRP10mL5mL無

  20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

  底物A6mL3mL無

  底物B6mL3mL無

  終止液6mL3mL無

  封板膜2張2張無

  說明書1份1份無

  自封袋1個1個無

  備注：

  1. 標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL

  2. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

  注意事項

  1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以準確結果。所有試劑都必須在使用達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

  3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

  4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

  5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

  6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

  7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

  9. 不能使用過期產品。

  10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

  試劑準備

  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)試劑盒(ELISA)操作步驟

  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

  實驗結果計算

  以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

  人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)試劑盒(ELISA)試劑盒性能

  1. 檢測范圍：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。

  2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 ng/mL。

  3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

  4. 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。

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