古朵教您正確選擇ELISA試劑盒顯色法檢測
古朵教您正確選擇ELISA試劑盒顯色法檢測
ELISA試劑盒對化學(xué)試劑的純度、凈度以及度要求愈加嚴(yán)格和專門化。ELISA試劑盒選擇十分重要了，主要參考以下四個方面：
一、檢測方式
如今檢測ELISA試劑盒有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶，而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶ap也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA試劑盒結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
二、實驗類型
雖然有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。 ELISA試劑盒和酶聯(lián)免疫斑點是兩種特殊的類型， ELISA試劑盒需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。有點像蛋白印跡，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是48孔板進(jìn)行ELISA試劑盒實驗。
三、抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒檢測，實際上有時候二者結(jié)合。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
四、交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個因素。盡管現(xiàn)在購買源自定動物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試劑盒檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實驗特異性就會大打折扣。ELISA試劑盒通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。
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