血清影響ELISA實驗假陽怎么辦?
血清影響ELISA實驗假陽怎么辦?
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。要怎樣解決呢?請看以下操作。
①用F(ab)2替代完整的IzG;
②標本用聯有熱變性(63C，10nin)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);檢測抗原時，可以用2-疏基乙酸等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
(2)補體ELISA&系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDT8稀釋標本;②用53，10nin或56C，30min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過里的動物Iz(s)，但加入里不足或亞類不同時無效。
(4)靶抗原的自身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干猶抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
(5)醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體;另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELIS測定時均可產生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時，在標本中加入足里的正常鼠Ig(s)，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
(6)交叉反應物質類AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，也會出現假陽性結果。
(7)進口elisa試劑盒標本中其它成分的影響血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定結果有干擾作用。
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