古朵快訊：ELISA試劑盒試驗常見問題簡析
古朵快訊：ELISA試劑盒試驗常見問題簡析
ELISA試劑盒實驗時的留心事項如下：
1、正式實驗時，應(yīng)別離以陽性對照與陰性對照操控實驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗成果的性。有時本底較高，闡明有非特異性反應(yīng)，可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2、在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很主要的，其間包括：
(1)固相載體的選擇：ELISA試劑盒很多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在運用前均可進行選擇：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，查詢其顯色反應(yīng)是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功用是不是出色。
(2)ELISA試劑盒包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時，懇求純度要好，吸附時通常懇求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響，通常多選用4℃18～24小時。ELISA試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后，在其它實驗條件相一同，查詢陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
(3)酶符號抗體作業(yè)濃度的選擇：ELISA試劑盒首先用直接ELISA法進行開端效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號抗體別離為不一樣的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度。
(4)ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇懇求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護。有條件者應(yīng)運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)參與強酸或強堿以停止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制作，尤其是H2O2在臨用前參與。
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