人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA試劑盒，檢測目的:用于測定血清，血漿及相關液體等樣本，例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本

人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA試劑盒說明書由上海古朵生物專業提供，本司詳細介紹了ELISA試劑盒相關產品的操作使用說明書，品牌，價格，規格 ，操作步驟，注意事項等，專業代理出售不同ELISA試劑盒品牌的進品/國產ELISA試劑盒，為客戶提供代測服務，ELISA種屬涵蓋有大鼠，小鼠，人，猴，雞，豬，狗，牛及其他科研實驗動物，了解更多種屬請來電咨詢！

中文名：人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA試劑盒
別名：人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA Kit
貨號：fk-m0043
供應商：上海古朵
規格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6個月
適用范圍:僅供科研使用,不得用于臨床
檢測目的:用于測定血清，血漿及相關液體等樣本，例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本
Elisa試劑盒安全性：
1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
5.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
6.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

酶聯免疫方法常見標本的處理方式：
1、采集血漿時一般不加抗凝劑（主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽），采集后立即離心800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存備用；
2、采集血清時，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室溫或4℃靜置半小時后，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存備用；
3、胃液和唾液的采集方式一般現采現用，一般飯后半小時內不易采集（剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶），的采集時間是空腹采集；
4、尿液的采集方式基本和唾液一樣的，即現采現用，但是一般隔夜尿不采集；
5、組織提取液（肺泡灌洗液等），采集后離心分離，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存備用；
6、糞便以及天然孔排泄物：采集后一般現用PBS/生理鹽水溶解，充分混勻，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存備用；
7、貼壁細胞或半貼壁（分泌性蛋白），直接將細胞培養上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
8、不貼壁細胞（分泌性蛋白），將培養基和細胞轉移至10ml離心管，500-800rmpx10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmpx10min，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
9、貼壁細胞或半貼壁（非分泌性蛋白），直接將細胞培養上清吸出，然后用0.01MPBS（pH7.4）將細胞吹下至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀轉移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
10、不貼壁細胞（非分泌性蛋白），將培養基和細胞轉移至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01MPBS（pH7.4）重懸，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理。

人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA試劑盒說明書 本試劑盒性能:
1．準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
2．靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。
3．特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA試劑盒說明書 本試劑盒標本要求：

1．標本采集后盡早進行實驗。血清、血漿可以直接檢測
2．組織：按相關文獻提取后，取上清液待測

3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

4．可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA試劑盒操縱步驟：

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為（60μg/L ，40μg/L，20μg/L，10μg/L， 5μg/L）。

2.加樣：分別設空缺孔（空缺對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操縱相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄往液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄往，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加進酶標試劑50μl，空缺孔除外。

7.溫育：操縱同3。

8.洗滌：操縱同5。

9.顯色：每孔先加進顯色劑A50μl，再加進顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空缺空調零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA檢測試劑盒計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回回方程式，將樣品的OD值代進方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

人25羥基維生素D(25-OH-D)ELISA Kit注意事項：

1.試劑盒從冷躲環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝進密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其正確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數目多，推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5.嚴格按說明書的操縱進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準

6.底物請避光保存。

7.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

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