人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒（大鼠，小鼠）組成及試劑配制：
1.酶聯板(Assay plate )：一塊(96孔)。
2.標準品(Standard)：2瓶(凍干品)。
3.樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。
5.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。
6.生物素標記抗體(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)
7.辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)
8.底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。
9.濃洗滌液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.終止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。



人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒（大鼠，小鼠）樣品收集、處理及保存方法：
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。



人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒（大鼠，小鼠）操作步驟：
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制)，37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。



人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒（大鼠，小鼠）注意事項：
1.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2.實驗中不用的試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
3.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
4.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
5.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
7.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
8.底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
9.加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
10.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。



人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒部分相關產品如下：
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