1、 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內進行。
2、 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5、在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)
6、將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標板洗滌后用吸水紙徹底拍干；
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10、各孔加入50μl終止液，終止反應；10、20-25℃下避光反應15分鐘；

牛免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒使用說明書操作注意事項：
1.不同廠家生產的試劑盒因生產工藝和操作方法略有不同，務必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產生檢測結果的不確定性.
2.若不同批號人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現顯色淺或本底高，花板等情形。
3.反應時間的誤差，做大量標本時，一孔和后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正?，F象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標本做奇數次復檢。
5.加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響大，建議校對加樣器。

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