人利鉀尿肽(KP)ELISA試劑盒操作步驟，產品用途：用于測定人血清,血漿,組織及相關液體樣本中的含量或活性。

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中文名：人利鉀尿肽(KP)ELISA 試劑盒
供應商：上海古朵
規格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6個月
特點：靈敏性高、特異性強、重復性好。
使用范圍：僅供科研使用,不得用于臨床。
產品用途：用于測定人血清,血漿,組織及相關液體樣本中的含量或活性。
檢測種屬：大小鼠,人,豚鼠,兔子,豬,犬,牛羊,雞鴨ELISA試劑盒等種屬。
檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
常見ELISA試劑盒：白介素、選擇素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、干擾素、轉化生長因子、趨化因子、細胞因子受體、粘附分子、生長因子、凋亡因子等等。


人利鉀尿肽(KP)ELISA試劑盒操作步驟 組成：
1：預包被板: 96T/48T
2：酶標記抗體: (30倍濃縮)HRPIgG,親合純化 0.4mL x 1
3：標準品: -6 0.5mL x 2
4：EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5：標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6：顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7：終止液: 1N硫酸 12mL x 1
8：濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1


人利鉀尿肽(KP)ELISA試劑盒操作步驟 實驗方法：
1、加入待測標本每孔0.05ml，并設HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結合物每孔1滴（0.05ml、空白對照孔不加），充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板：棄去反應條孔內液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復五次后拍干。
3、顯色劑：先加顯色劑A每孔1滴（0.05ml），然后再加顯色劑B每孔1滴（0.05ml），混勻，37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴（0.05ml），混勻。

實驗結果：
比色法：波長450nm，先用空白孔校零點，然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。
備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8，實驗結果有效。


人利鉀尿肽(KP)ELISA試劑盒操作步驟 液體類標本：
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1）血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2）血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4）細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5）組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。



人利鉀尿肽(KP)ELISA試劑盒操作步驟 操作步驟：
1、加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
7、終止：每孔加終止液50l，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。



人利鉀尿肽(KP)ELISA試劑盒操作步驟 注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。


人利鉀尿肽(KP)ELISA 試劑盒操作步驟 樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。