小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒，試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

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中文名：小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒
別名：Mouse 5-Nucleotidase,5-NT ELISA Kit
供應商：上海古朵
規格：48t/96t
保存：2-8℃低溫保存
有效期：6個月
試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。
ELISA試劑盒價格檢測范圍：人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細胞因子、植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。



小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒說明書 組織結構：
1、 血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心35分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心60分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液：1000×g離心32分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心33分鐘，取上清液。
5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。



液體類標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5. 培養細胞
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
6. 組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。



小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒說明書操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從一孔、第二孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為120 U/L ，80 U/L，40 U/L，20 U/L，10 U/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。



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