人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書，檢測樣品/Sample Type：Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血漿等其它生物樣品

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中文名：人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒
英文名稱:Human androgen receptor (AR) ELISA kit
供應商：上海古朵
規格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
種屬/Organism：Human/人
指標名稱/Other Names：AR
檢測方法/Method：Sandwich-ELISA/雙抗體夾心ELISA
檢測范圍/Detection Range：0.31-20 ng/mL
靈敏度/Sensitivit：0.19 ng/mL
檢測樣品/Sample Type：Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血漿等其它生物樣品



檢測原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人AR抗體包被于酶標板上，實驗時標本或標準品中的AR會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AR抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人AR抗體與結合在包被抗體上的人AR結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現藍色，加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值，AR濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線求出標本中AR的濃度。




標本收集:
血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融，6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數)。


人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書 使用方法：
1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。
3.棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。
5.棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據實際顯況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止)。
7.每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。
9.實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。



人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書 注意事項：
1,封閉中的蛋白會非特異性將ELISA板子中沒有結合包被物的位點封閉掉,這樣之后加入的抗原或者抗體就不會再和板子發生非特異性的結合.使ELISA的結果更加的準確品
2，固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
3，包被抗體的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，蛋白質包被的適濃度需進行滴定然后觀察陽性標本的OD值。
4，酶標記抗體工作濃度的選擇：先用直接ELISA法進行初步效價的滴定，然后再固定其它條件，后在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
5， ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，如 TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。



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