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中文名：異常凝血酶原(APT)ELISA 試劑盒
規格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
樣本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存，操作簡便。
用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
運輸方式：現貨供應，一般為快遞運輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。


異常凝血酶原(APT)ELISA試劑盒 操作步驟：
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50?l。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l，然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50?l，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50?l，再加入顯色劑 B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50?l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。


異常凝血酶原(APT)ELISA試劑盒 操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。



ELISA 試劑盒 17 個相關操作技巧如下：

  1. 切記在加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
  2. 合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。
  3. 在吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
  4. 務必做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的度
  5. 樣品稀釋液應用加液器加注，并經常校對其準確性。
  6. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
  7. 未使用完的酶標板或者試劑，請于 2-8℃ 保存。辣根過氧化物酶標記抗人 IgG 工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗人 IgG 工作液。
  8. ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。
  9. 剩余樣品及廢棄物應經 121℃ 高壓蒸汽滅菌 30 分鐘，或用 5.0g/L 次氯suan鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。
  10. 人 ELISA 試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
  11. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及 2N H2SO4。測量時先用此孔調 OD 值至零。
  12. 手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置 15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
  13. 對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
  14. 沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
  15. 在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。
  16. 吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，人 ELISA 試劑盒吸取的量不夠準確。
  17. 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。





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