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48T/96t 羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒
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48T/96t 羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒

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產品名稱:48T/96t 羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒

產品型號:48T/96t

產品廠商:上海古朵生物科技有限公司

簡單介紹

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48T/96t 羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒的詳細介紹

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中文名:羥賴氨酸(Hyl)ELISA 試劑盒
規格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個月
樣本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點:敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存,操作簡便。
用途:用于測定血清,血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
運輸方式:現貨供應,一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。



羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒 操作注意事項:
1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7)底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。




羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒 樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。



特點:
1.專一性強。抗原與抗體的免疫反應是專一反應,而免疫酶技術以免疫反應為基礎,所檢測的對象是抗原(或抗體),使用的抗體除標記了酶以外,與普通抗體的免疫反應特性并無多大差別。
2.靈敏度高。由于抗體聯結上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應,顯示抗原與抗體的結合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。
3.樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定,因此有利于樣品的保存。
4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計進行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變,從而引起被檢測物的顯示。
5.可以定量測定。溶液中的抗原物質,應用酶免吸附技術進行比色測定,依據光密度值的變化,可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行免疫酶技術的定量測定。
6.可以大規模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測,免疫酶技術都能在較短時間內完成。
7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說,不需要熒光顯微鏡,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑,普通實驗室及生產應用單位均易購置.





技術原理:
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
(2). 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。


操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。



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