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中文名：Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA 試劑盒
規格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
樣本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存，操作簡便。
用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
運輸方式：現貨供應，一般為快遞運輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒 技術原理：
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
(2). 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。



Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒 操作步驟：
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50?l。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l，然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50?l，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50?l，再加入顯色劑 B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50?l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。





操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。


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